無菌控制專題（八）|友康細(xì)菌真菌支原體檢測試劑盒產(chǎn)品性能

這期文章，我們就用具體的數(shù)據(jù)來說話，深入了解友康生物細(xì)菌真菌支原體檢測試劑盒的產(chǎn)品性能到底怎么樣。

細(xì)菌檢測試劑盒

已驗證可以檢測中國藥典提到的5種100 CFU/mL的驗證菌（金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌和大腸埃希菌），且與真菌、支原體無交叉反應(yīng)，與293細(xì)胞DNA、NK細(xì)胞DNA和間充質(zhì)干細(xì)胞DNA無交叉反應(yīng)。

以銅綠假單胞菌為例，使用菌液濃度為10~0.05 CFU/mL，結(jié)果展示銅綠假單胞菌的檢出限為0.5 CFU/mL。

以生孢梭菌為例，使用菌液濃度為5~0.05 CFU/mL，結(jié)果展示生孢梭菌的檢出限為0.5 CFU/mL。

本檢測試劑盒重復(fù)生產(chǎn)3個批次，檢測提取后的5種100 CFU/mL的驗證菌。結(jié)果見下表，可以穩(wěn)定檢出100 CFU/mL的5種驗證菌，且3個批次的結(jié)果一致，試劑盒重現(xiàn)性好，CV<10%。

將內(nèi)部對照質(zhì)粒與不同培養(yǎng)基用友康磁珠提取試劑盒提取后，經(jīng)真菌qPCR體系檢測，內(nèi)參HEX通道的檢出Ct值29~31浮動，陽性FAM通道除陽性對照外均無檢出。

按照藥典要求分別制備10、50 CFU/mL濃度的白色念珠菌和黑曲霉。使用不同批次友康磁珠提取試劑盒提取，不同批次真菌qPCR體系檢測，均可穩(wěn)定檢測2種濃度的2種真菌。兩種真菌的檢出限都是50 CFU/mL。

在3次不同的時間由不同的人員分別配置體系檢測相應(yīng)濃度的真菌，結(jié)果可以穩(wěn)定檢出50 CFU/mL濃度的白色念珠菌和黑曲霉。

驗證結(jié)果顯示，與支原體進(jìn)化樹上相近的物種（如丙酮丁醇梭菌、嗜酸乳桿菌和肺炎鏈球菌）無交叉反應(yīng)，與其他常見細(xì)菌（金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞桿菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌、大腸埃希菌）、真菌（白色念珠菌、黑曲霉）以及細(xì)胞DNA（NK細(xì)胞、293細(xì)胞以及干細(xì)胞的DNA）均無交叉反應(yīng)。

采購歐盟藥典推薦的三個近親屬菌株的定值菌液，原始濃度為10⁹ CFU/mL，用DMEM培養(yǎng)基稀釋至10⁴~10²CFU/mL后，用本公司磁珠法核酸提取試劑盒提取后驗證。

參照中國藥典2020版，采購相應(yīng)支原體培養(yǎng)基對口腔支原體（ATCC23714）進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)物稀釋至10^-3、10^-4、10^-5三個稀釋倍數(shù)，置于37℃培養(yǎng)28天，結(jié)果10^-5稀釋倍數(shù)的三管為陰性（沒有變色），其它全部為陽性，培養(yǎng)法的靈敏度達(dá)到10^-4，符合中國藥典要求。

不同濃度樣本經(jīng)提取后，使用試劑盒檢測可以穩(wěn)定檢出10^-5倍數(shù)稀釋的樣本，靈敏度提高了10倍。

使用相同批次的支原體檢測試劑盒，分為三組在三種不同環(huán)境下，對相同的樣本進(jìn)行提取驗證，結(jié)果一致性好。