NK細胞培養(yǎng)的現(xiàn)狀

NK細胞療法在治療惡性腫瘤的效果上如此出眾，之所以沒有被廣泛應(yīng)用起來，和NK細胞培養(yǎng)方法的局限性有脫不開的關(guān)系。NK細胞體外培養(yǎng)擴增困難，不論是什么來源的NK細胞，外周血、臍帶血或者是干細胞來源，擴增都是目前一個比較大的瓶頸。

當(dāng)下常用的NK細胞體外擴增方法，主要有以下4種方式：

滋養(yǎng)層體系：一般通過K562細胞或經(jīng)基因改造的K562細胞誘導(dǎo)擴增NK細胞，這種方法的優(yōu)點在于細胞擴增活率高、速度快，容易獲得高表型的CD56+ NK細胞，純度高，殺傷性強。但是引入的滋養(yǎng)層細胞為腫瘤細胞，其潛在安全風(fēng)險難以完全消除，這也會導(dǎo)致這種方式培養(yǎng)的NK細胞產(chǎn)品在藥物申報方面獲批的難度更大。此外，正常的細胞和腫瘤細胞共培養(yǎng)，將這樣的細胞用于治療回輸體內(nèi)，有很大的倫理風(fēng)險，患者心理難以接受。

外周血或臍帶血PBMC誘導(dǎo)：通過細胞因子誘導(dǎo)PBMC分化成NK細胞，這種方法使用的原本都是體內(nèi)就有的因子，相當(dāng)于模擬了體內(nèi)環(huán)境，安全性更高。但是受限于血液樣本初始NK比例的不穩(wěn)定，培養(yǎng)的最終結(jié)果可能偏差較大，生產(chǎn)效率比較低，而且培養(yǎng)過程中需消耗大量細胞因子，成本較高。此外，市面上的純因子培養(yǎng)工藝水平參差不齊，這就導(dǎo)致細胞的純度可能不夠，存在脫靶效應(yīng)，殺傷效果偏弱。雖然純因子的培養(yǎng)方法存在諸多問題，但是其安全性足夠高，這就使得NK產(chǎn)品申報的獲批難度有所降低。因此，純因子培養(yǎng)法成為了當(dāng)下主流的NK細胞培養(yǎng)方式。而且隨著無血清產(chǎn)品的面世、NK細胞培養(yǎng)試劑的迭代升級，越來越多的企業(yè)選擇純因子培養(yǎng)法，這也會進一步促進上游企業(yè)研發(fā)性能更出色的產(chǎn)品反饋下游應(yīng)用，從而形成一個良好的正向循環(huán)。

NK-92細胞系：NK92細胞是一種無限增殖的細胞系，具有高效的細胞毒性和穩(wěn)定的免疫特性。NK92細胞更容易獲取和擴增，容易培養(yǎng)，但是NK92的缺點也很明顯，它對IL-2過于依賴，對人的身體負擔(dān)很大，而且缺乏CD16的表達，殺傷能力較差，在使用時需要輻照處理、存在致瘤性，在體內(nèi)存活時間極短。

iPSC或ESC誘導(dǎo)的NK定向分化：通過誘導(dǎo)iPSC或ESC定向分化成NK細胞，這種方法技術(shù)壁壘很高，而且iPSC的致瘤性尚未妥善解決，安全性和臨床有效性仍需面臨監(jiān)管挑戰(zhàn)。如果要應(yīng)用在臨床中，恐怕還有很長一段路要走。