核酸檢測(cè)的原理是什么？

核酸分為脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。以細(xì)胞為單位的生命體的遺傳信息都是以脫氧核糖核酸的形式被儲(chǔ)存在基因里的。

生活中大部分常見(jiàn)的致病性病毒的遺傳物質(zhì)是核糖核酸(RNA)。

核酸檢測(cè)實(shí)質(zhì)上就是對(duì)病毒的遺傳物質(zhì)RNA進(jìn)行的檢測(cè)。

目前常用的新冠狀病毒的核酸檢測(cè)方法為實(shí)時(shí)熒光RT-PCR核酸檢測(cè)。其檢測(cè)原理為：

1、提取樣本中的RNA

RNA中可能來(lái)自新冠狀病毒的RNA，也可能來(lái)自采樣患者的組織和存在于采樣部位的微生物的RNA。

2、逆轉(zhuǎn)錄

通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄酶將樣本的RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。因?yàn)樾鹿跔畈《局械腞NA極易降解，為了防止在檢測(cè)過(guò)程中降解，我們把它轉(zhuǎn)換為更穩(wěn)定的DNA。

3、擴(kuò)增cDNA

用PCR的方式，以cDNA為模版，用新冠狀病毒的特異性的引物合成DNA，達(dá)到擴(kuò)增cDNA的目的。這里特異性的引物設(shè)計(jì)出來(lái)只能與新冠狀病毒核酸的序列相匹配結(jié)合來(lái)擴(kuò)增出目的產(chǎn)物。所以只有采集的樣本中含有新冠狀病毒才能擴(kuò)增出目的產(chǎn)物。

4、檢測(cè)擴(kuò)增出的PCR產(chǎn)物，即DNA片段

我們擴(kuò)增的病毒DNA片段能夠發(fā)出熒光而被儀器檢測(cè)到。這些擴(kuò)增出的供我們檢測(cè)的產(chǎn)物的多少，很大程度上取決于樣本中目標(biāo)RNA量的多少。而目標(biāo)RNA量的多少又與樣本中病毒的多少相關(guān)。

現(xiàn)在的病毒核酸檢測(cè)試劑盒，多數(shù)采用熒光定量PCR方法。檢測(cè)原理就是以病毒獨(dú)特的基因序列為檢測(cè)靶標(biāo)，通過(guò)PCR擴(kuò)增，使我們選擇的這段靶標(biāo)DNA序列指數(shù)級(jí)增加，每一個(gè)擴(kuò)增出來(lái)的DNA序列，都可與我們預(yù)先加入的一段熒光標(biāo)記探針結(jié)合，產(chǎn)生熒光信號(hào)，擴(kuò)增出來(lái)的靶基因越多，累積的熒光信號(hào)就越強(qiáng)。而沒(méi)有病毒的樣本中，由于沒(méi)有靶基因擴(kuò)增，因此就檢測(cè)不到熒光信號(hào)增強(qiáng)。所以，核酸檢測(cè)，其實(shí)就是通過(guò)檢測(cè)熒光信號(hào)的累積來(lái)確定樣本中是否有病毒核酸。