友康全自動樣本處理與核酸提取工作站，詮釋穩(wěn)定之道——第一彈

歷經(jīng)300多天的每天24小時不間斷的反復實驗測試與分析優(yōu)化，友康全自動樣本處理與核酸提取工作站現(xiàn)已“身經(jīng)百戰(zhàn)，百煉成鋼”！接下來我們將以一系列實驗專題持續(xù)放送它的硬核戰(zhàn)力值報告——本期我們聚焦它的核酸所得率和靈敏度進行探究。

核酸提取的目的是為了最終的檢測結(jié)果，即陰性或陽性，核酸提取的效果直接決定了最終檢測的結(jié)果，如果設(shè)備提取效果差，所得核酸濃度不足以檢測出來，可能出現(xiàn)“假陰性”。

為了盡量多的獲得核酸，需要根據(jù)所使用的試劑，匹配出最優(yōu)的核酸提取參數(shù)，在設(shè)備開發(fā)之初我們就將所有可能用到的參數(shù)設(shè)置成了開放性的，比如添加試劑的孔位、添加試劑的液量、核酸混勻的時間、核酸混勻的速度、等待時間、晾干時間、吸磁時間等等，通過大量的試驗，我們確定了友康三步法的參數(shù)。

真正的實驗效果如何呢？是否真的足以取締人工提取的工作呢？百聞不如一見，讓實驗數(shù)據(jù)給我們最安心的答案——

實驗材料：

1：病毒液

配置6種不同濃度梯度的病毒液，最高濃度為2e⁶copies/mL，最低濃度為20copies/mL。依次10倍稀釋，每個濃度梯度下設(shè)置3個采樣管。

2：試劑

準備三種需要的試劑，分別為洗脫液、清洗液和磁珠混合液。三種溶液在儀器中擺放的順序，從左向右依次是：洗脫液、磁珠混合液、清洗液。

3：耗材

一輪測試需要耗材：1000uL TIP頭：1盒，100ml試劑槽：3個，96深孔板：4個，磁棒套：6個，PCR管：3個

準備實驗：

插入磁棒套，放入深孔板，放入TIP頭，將試劑加入試劑槽，放到相應位置，將PCR管放到對應位置，套垃圾袋；將樣本管放到樣本架上，插入第一排樣本架。（先放耗材再放樣本，若先放樣本，更換新的手套后再放置耗材，防止因不當?shù)氖止げ僮鲗е碌慕徊嫖廴荆?/p>

對比手工提?。?/strong>

將各組濃度的病毒液采用相同的提取試劑，按照說明書給定的操作說明進行手工提取，得到各組的核酸。

機器提取6個濃度梯度病毒核酸，PCR檢測，三批試驗中各組的擴增曲線：

對比檢測：
將提純的核酸與相同樣本和試劑手工提取的核酸進行體系構(gòu)建后放入pcr檢測儀進行檢測，對比檢測結(jié)果。機器與手工提取可以達到相同的檢測靈敏度，同時在每個濃度梯度條件下，機器與手工的Ct值之間的差異均不大于1。

實驗結(jié)果：

以上3組數(shù)據(jù)平均數(shù)做標準曲線，R2=0.9963，各組數(shù)據(jù)，檢測的Ct值與病毒濃度的對數(shù)值之間呈現(xiàn)較好的線性關(guān)系。

實驗結(jié)論：

（1）機器與手工提取6個濃度梯度病毒核酸，pcr結(jié)果顯示：兩種提取方式的一致性較高，每個濃度梯度下，兩種方式提取核酸檢測結(jié)果Ct值相差均不大于1。

（2）機器與手工提取6個濃度梯度病毒的核酸，pcr結(jié)果顯示：兩者可以做到相同的靈敏度，檢測下限均可以做到200 copies/mL。

（3）檢測得到的Ct值與病毒稀釋的梯度有明顯的線性關(guān)系，說明提取得到核酸的量與病毒的真實濃度之間呈現(xiàn)正比例關(guān)系。進而說明機器提取核酸性能穩(wěn)定，效果沒有大幅的波動。